化学合成多肽原料药的质控项目有哪些？

   ---化学合成多肽原料药的质量研究

    合成多肽原料药的质量研究除参考小分子化学药物的研究思路进行常规项目的研究外，还应根据合成多肽的制备工艺、结构和理化特性等增加一些特定的考察项目，例如氨基酸组成分析、反离子含量等。表3列举了合成多肽原料药的质控项目作为参考,仅作为示例展示，并不代表全部情况，应根据产品特性拟定具体考察项目。

表1 合成多肽原料药的质控项目

检查项	注释
鉴别
高效液相色谱(HPLC)	供试品溶液与对照品溶液主峰的保留时间一致，推荐采用等剂量混合进样，应得到单峰
质谱(MS)	应在理论值(单同位素分子量或平均分子量)+1.0 Da范围内，大于2kDa的多肽建议使用高分辨率仪器
氨基酸组成分析(AAA)	应明确水解和衍生化方法
检查
氨基酸比值	应明确水解、衍生化方法和计算方法，需开展方法学验证
反离子含量	应明确是否存在反离子;根据多肽药物结构中的理论反离子含量在质量标准中拟定合理的上下限范围
肽相关杂质(或称有关物质)	应采用杂质对照品进行方法学验证(如工艺杂质、降解杂质、差向肽杂质等)，关注方法的专属性
残留溶剂	重点关注生产过程中接近终产品工艺步骤所用到的溶剂
元素杂质	参考ICH Q3D根据风险评估结果对可能引入的元素杂质进行控制
水分	多肽通常具有引湿性，水分可能显著影响药物的含量和稳定性，应根据开发过程和稳定性考察的历史批次数据在质量标准中设定水分的可接受标准。
含量测定
高效液相色谱(HPLC)	可参考有关物质1鉴别方法(与对照品比较)

注:注射用原料药建议对微生物限度和细菌内毒素进行研究。

1、鉴别
    多肽药物的鉴别方法应具有专属性，通常采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)和质谱法(MS)。此外，还可考虑使用氨基酸组成分析(AAA)、肽图分析或核磁共振波谱(NMR)等不同原理的鉴别方法进行正交确认。

2、氨基酸比值
    氨基酸分析数据可用于计算多肽药物的氨基酸比值。氨基酸分析的水解方法可参考相关技术指南进行。通常选择在水解处理中稳定的氨基酸用于多肽的定量研究，此类氨基酸主要有门冬氨酸或门冬酰胺、谷氨酸或谷氨酰胺、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和精氨酸。可根据多肽药物的氨基酸序列及不同氨基酸测定方法调整用于定量研究的氨基酸种类。需明确氨基酸比值水解方法和计算方法，同时，应进行相应的分析方法验证工作，证明方法的适用性。

3、杂质

根据化学合成多肽药物的杂质特点，可将其分为肽相关杂质和非肽杂质。
     (1)肽相关杂质
      肽相关杂质(或称有关物质)是指与目标分子结构有关.的杂质，是反映多肽化学纯度的重要指标之一。肽相关杂质可由起始物料引入、生产工艺副反应或长期放置过程中降解产生。表4列举了肽相关杂质的常见类别及来源，仅作为常见示例展示，并不能代表全部情况，应结合产品特性进行评估和分析。

表2 肽相关杂质的类别及来源

              

    由于部分肽相关杂质的结构、性质与主成分较为相似，采用单一原理的分析方法可能无法完全分离，推荐采用多种不同原理的检测方法进行有关物质检查。有关物质检查方法除常见的高效液相色谱外，还可考虑使用离子交换色谱、毛细管电泳法等。聚合物检查可采用分子排阻色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳法等。
    差向肽类杂质的色谱行为多与主成分非常接近，鉴定和分离难度大。可使用氘代试剂水解多肽(例如氯化氘(DCI)/氘代水(D2O)) ，采用Marfey试剂(FDAA) 、邻苯二甲醛(OPA)或三氟乙酸酐(TFAA) 等对水解后的氨基酸进行衍生，采用相应检测手段测定每个氨基酸手性异构体的含量，判断出肽链中易发生消旋的氨基酸，进一步制备相应的异构体杂质对照品进行针对性研究。

有关物质检查方法学验证过程中应重点关注专属性问题，可选择与目标肽结构相近的工艺杂质和降解杂质对照品进行分离度考察，或采用多肽粗品和强制降解试验样品检验主峰峰纯度。由于多肽一般为末端吸收，采用DAD检测器无法有效反映峰纯度，可采用液质联用等方法对主峰峰纯度进行研究。结合有关物质项目中确定的特定杂质，采用相应的杂质对照品进行全面的方法学验证。
    本指导原则将肽相关杂质的报告限、鉴定限和质控限分别制定为0.1%、0.5%和1.0%。 如发现多肽药物杂质存在安全性隐患，应适当收紧杂质限度要求。

    (2)非肽杂质
    非肽杂质是工艺过程中引入的与目标分子结构不相关的杂质，包括反应试剂和溶剂、金属催化剂、缩合剂等残留物,此类杂质的研究可参照小分子化学药物相关指导原则进行。多肽药物在合成过程中，需使用不同类型的缩合剂、保护基团等，此类物质在反应过程中可能生成含有警示结构的小分子副产物。应制定合理的控制策略，例如，可采用具有代表性的化合物或接近终产品工艺步骤生成的化合物进行针对性的清除效力研究，以证明采用的分离纯化方式可有效去除相应杂质。

4、含量测定
    含量测定是评价多肽质量的重要指标之一，通常在无水、无反离子的基础上进行研究。-般可采用HPLC法，通过与对照品进行比较，得到目标多肽占总物质的百分比。若经充分的方法学验证，也可采用其他原理的分析方法。